牛樟芝能延長小細胞肺癌患者的生存期

英文文獻出處：Medicina (Kaunas). 2019 Sep 26;55(10):640.

目前癌症治療仍以手術、放射線、化療為主。

摘要

簡介：牛樟芝（AC）是一種非常稀有的藥用真菌，原產於台灣林區。它具有多種生物學活性，尤其是在各種體外癌細胞和體內動物模型中顯示出的抗腫瘤作用。但是，很少有關於AC作為癌症患者治療的臨床報導。該報告試圖證明碟式培養的AC（DAC）對長時間口服的小細胞肺癌（SCLC）患者的治療效果。病人擔憂：一位88歲的男性，有糖尿病和高血壓病史，曾到門診就診，出現呼吸困難和咳嗽症狀，持續了兩週。診斷為SCLC後，該患者由於副作用而拒絕接受化學療法和放射療法，並且僅接受支持治療而未進行其他治療。診斷：胸部X線片檢查，CT掃描引導下的活檢和病理學診斷後，限期SCLC（T4N2M1a，IV期）。干預措施：患者接受DAC劑量增加，從5 g / d到10 g / d DAC，持續六個月，未經放射或化學療法治療。結果：DAC使腫瘤明顯縮小。令人驚訝的是，該患者在DAC治療六個月後存活了32個月，沒有復發。實驗室檢查表明，患者的健康狀況得到了顯著改善，已恢復到接近正常水平。值得注意的是，他的生活質量很高，而且Barthel指數得分很高。不幸的是，該患者死於急性膽管炎引起的敗血性休克。結論：DAC具有抗癌作用，可導致腫瘤消退。可以認為這是通過DAC通過多種信號途徑介導的免疫調節，抗血管生成，抗轉移，抗增殖和促凋亡作用共同實現的。我們建議將DAC用作補充藥物，以延長SCLC患者的預期壽命並改善其生活質量。

前言

小細胞肺癌（SCLC）是所有肺癌亞型中最具侵略性的，約佔肺癌的15％，而非小細胞肺癌（NSCLC）約佔85％[1]。 它具有不良的預後，並且與吸煙高度相關。 大多數患者可以對基本療法產生反應，但存活率很低，據報導，有限期疾病患者的中位生存時間約為14-20個月，廣泛期疾病患者的中位生存時間分別為7-10個月[2]。 。 據報導，SCLC在有限和廣泛階段的總體5年生存率分別僅為12–17％和2％[3]。 通常，SCLC在診斷後未經任何治療會導致2-4個月內死亡[4]。 在有限期SCLC中，可以同時進行化學放療（CCRT）來治療腫瘤塊和淋巴結。 但是，由於CCRT的副作用引起的困難，許多患有這種晚期疾病的患者選擇拒絕接受治療。

在澳大利亞，據估計約有17％至87％的癌症患者在癌症治療期間使用了一種或另一種補充療法[5]。 癌症患者考慮使用補充和替代藥物（CAM）的原因和因素很多，例如與診斷相關的身體和情緒困擾，在使治療產生不利影響的情況下治療方法有限以及缺乏治療方法。 在晚期癌症中具有實質性的生存益處[5]。 平均51％的使用CAM的癌症患者的常見原因是癌症和總體健康狀況的改善以及癌症或治療引起的並發症的減少[6]。

藥用真菌牛樟芝（AC）是台灣著名的中草藥，已知具有多種生物活性，尤其是在體外癌細胞和體內動物模型中的抗腫瘤作用[7,8]。考慮到其多種生物活性化合物，它被認為是一種有效的替代性植物治療劑或癌症治療和免疫相關疾病的佐劑[9]。總共225種化合物已被分離，鑑定和結構闡明，包括大分子（核酸，蛋白質和多醣），小分子（苯甲酸酯，木脂素，苯醌和馬來酸/琥珀酸衍生物），萜類化合物（羊毛脂三萜烯，麥角甾烷）三萜，二萜，單萜和類固醇），核苷酸（核鹼基和核苷），脂肪酸和脂肪酸酯[10]。體外和體內的累積研究顯示其抗糖尿病和抗高血脂症[11]，抗高血壓[12]，抗炎[13]，抗氧化劑[14]，抗微生物[15]，預防心血管疾病[16]，免疫調節[17]，對肝臟有保護作用[18]和對神經有保護作用[19]。 AC的抗癌作用可能涉及生物活性化合物混合物的協同作用，其中每種化合物負責其自身的特定分子機制，包括促進細胞凋亡，細胞週期停滯，抗遷移，抗血管生成和抗發炎[10]。此外，AC還通過其獨特的多醣成分促進Th1主導狀態和自然殺傷細胞活性，通過增強免疫系統來間接作用於腫瘤[20]。另一方面，AC（EEAC）菌絲體粉末的乙醇提取物通過抑制血管內皮生長因子受體2（VEGFR2）的磷酸化和VEGF處理的人臍靜脈內皮細胞中促血管生成激酶的表達而發揮抗血管生成作用。 （HUVECs），除了減少Janus激酶2（JAK2）的表達以及信號轉導和轉錄激活因子3（STAT3）的磷酸化外[21]。

很少有關於癌症患者使用AC的臨床研究參考。此前，2016年發表的一項雙盲人體試驗（試驗註冊：ClinicalTrials.gov NCT01,287,286）評估了聯合化療聯合使用AC的臨床效果[22]。在這項研究中，符合條件的III–IV期腺癌（肺癌，乳腺癌，胃癌，肝癌或結直腸癌）患者被安排接受鉑類化療，隨後被隨機分為AC組或安慰劑組。發現的唯一顯著差異是患者的血小板計數（AC組較低）和睡眠質量（也顯著改善）[22]。但是，結果並未顯示6個月平均生存率有顯著差異。但是，該試驗可能為時過早，因為治療僅持續了30天。

在本報告中，我們證明了僅使用碟式培養的AC（DAC）治療6個月的患者的抗腫瘤作用以及改善健康的結果，與平均2–2的平均生存時間相比，該患者的生存時間延長至32個月在類似病例中4個月未接受DAC治療[4]。

個案報告

參加研究之前，患者已徵得他的知情同意。 該研究是根據赫爾辛基宣言進行的，並得到了佛教慈濟醫學基金會花蓮慈濟醫院研究倫理委員會的批准（案例報告批准代碼：CR108-05，表格編號E6C0021106-03）。 當選患者為88歲的SCLC男性。 收集並分析了所有檢查數據，包括胸部X光片，計算機斷層掃描（CT）和血液學檢查。 在整個研究過程中，通過定期訪談來監測患者的健康狀況。

2015年12月，一位88歲的患有糖尿病和高血壓病史的男性到仁愛醫院大理分院（台灣台中）的門診就診，出現呼吸困難和咳嗽症狀，持續了2週。在過去的三個星期中，他的體重也減輕了2公斤。他否認發燒或發冷，胸痛，咯血，噁心或嘔吐，腹痛，腹瀉或排尿困難。體格檢查顯示通過胸部聽診有基底性裂紋。實驗室數據顯示無白細胞增多症（白細胞，白細胞計數為7,520 / uL）。細分的WBC為72.6％。胸部X光片顯示右下肺野有腫瘤塊。 CT引導的活檢被安排用於進一步的病理檢查（圖1a）。病理檢查顯示浸潤性癌具有高的核質比，核成型和有絲分裂活性增加（表S1）。免疫組化顯示甲狀腺轉錄因子1（TTF-1）（+），CD56（+），嗜鉻粒蛋白A（-），神經元特異性烯醇化酶（NSE）（-）和突觸素（弱+）。此外，胸部CT在右下肺野，縱隔淋巴結腫大和右側胸腔積液中顯示出巨大的腫瘤（最大尺寸為17.26×9.78 cm）（圖1a）。癌胚抗原（CEA）水平為18.4 ng / mL（參考值：男性<3.4 ng / mL，吸煙<6.2 ng / mL）。活檢標本於2015年12月在組織學上診斷為SCLC。根據癌症委員會多學科會議的結論，臨床分期為IV期（cT4N2M1a，有限期）。然而，由於相關的潛在副作用，患者拒絕了化學療法和放射療法，並且僅接受了支持治療而沒有進一步的腫瘤治療。醫療時間表如圖2所示。

隨後，患者同意從2016年2月至7月每天服用一次溶解於水中的DAC（從5 g / d到10 g / d），共計6個月。患者的飲食，藥物和日常生活 在DAC治療期間由患者的妻子照顧。 在此期間，他的胸部和背部疼痛，呼吸急促和生產性咳嗽症狀逐漸好轉。 因此，如Barthel指數得分高（100/100）所示，他過著不錯的生活質量。 2017年7月，胸部CT隨訪顯示腫瘤腫塊明顯縮小（最大尺寸為8.89×3.90 cm）（圖1b）。 經過DAC治療後，患者沒有出現任何晚期肺癌的症狀，如呼吸急促，胸痛，咳嗽，咯血或疲勞。

服用DAC後，他的空腹糖和糖化血紅蛋白水平升高到正常範圍（圖3a），舒張壓（DBP）升高（圖3a），丙氨酸轉氨酶（ALT）和天冬氨酸轉氨酶（AST）降低，C -反應蛋白（CRP）下降到正常範圍（圖3b），血清肌酐下降，估計的腎小球濾過率（eGFR）恢復到正常範圍（圖3c），分段的中性粒細胞計數下降到基線水平，淋巴細胞低 計數恢復到正常水平（圖3d）。

2016年7月，患者因心髒病發作去世，妻子死亡時情緒低落，並意外停止使用DAC。 兩年後（2018年8月），該患者死於急性膽管炎引起的敗血性休克，這與限期SCLC無關。

甲醇提取物的製備

AC的子實體（別名：樟芝；台灣樟腦；靈芝；樟腦）於2012年5月從台灣花蓮縣榆裡採集。該物種由中藥系黃冠中副教授鑑定。 中國醫科大學科學與中藥資源，台灣台中。 憑證標本存放在國立東華大學生命科學系和生物技術研究所。 AC在培養皿中的人工瓊脂培養基上培養。 DAC原料粉由Longs Biotech Co.，Ltd.（台灣華蓮）提供。 DAC原粉的甲醇（MeOH）提取物是根據台灣寶藏Antrodia cinnamomea協會（台灣台北的獨立協會）按照未公開的修改程序製備的[23]。

DAC甲醇提取物的高效液相色譜（HPLC）譜

台灣寶藏A. cinnamomea協會按照未公開的修改程序[23]對DAC的甲醇提取物進行代謝譜分析和定量。 簡而言之，通過HPLC分析對DAC中每種指標化合物的含量進行定量。 然後定義DAC甲醇提取物（已知的負載濃度，例如100 ppm）色譜圖中的索引化合物的峰面積，並根據從內標物（甲苯或甲苯 地塞米松（5 ppm）校準曲線。

由A評估並提供木態培養的AC（子實體）（圖4a），DAC（子實體）（圖4b）和DAC（子實體和菌絲體）（圖4c）的甲醇提取物的HPLC譜圖。 台灣珍寶協會 DAC的甲醇提取物（子實體）顯示出與木態培養的AC類似的三萜類化合物，其中含有相同的七個指標化合物。 DAC（子實體和菌絲體）也具有與木態培養的AC相似的三萜類成分，但是與DAC（子實體）相比，脫氫磺化尿酸（DSA）和脫氫表皮酸（DEA）的比例更高。 表1顯示了野生AC子實體中表徵的七個索引化合物[23]。

討論

病人案例

通常，IV期SCLC由於其侵襲性惡性腫瘤，在診斷後2-4個月內如果不治療就可導致死亡。 在這里報道的病例中，僅接受DAC六個月的SCLC患者在臨床診斷後成功存活了32個月。 此外，在DAC治療期間，他的胸部和背部疼痛，呼吸急促和持續咳嗽逐漸得到改善。 此外，DAC治療後體重從60.8千克增加到69.0千克，可能表明患者已恢復了正常的身體狀況（圖3a）。

DAC治療六個月後，患者的SCLC腫瘤縮小。 DAC可能抑制ACLC子實體中的活性化合物antrocin，從而抑制SCLC細胞的增殖並促進細胞凋亡，從而增加caspase-3的裂解水平和Bax / Bcl2的比例，並通過增加microRNA來下調JAK / STAT信號通路。 let-7c表達式[7]。另外，來自AC菌絲體（SGA）的硫酸化葡聚醣也可能通過抑制TGF-β/ FAK / AKT軸而抑制SCLC腫瘤細胞的活力和遷移[24]。大多數SCLC患者在治療後一年內就會復發[3]。在這種情況下，使用DAC治療六個月後，患者存活了兩年以上，且未復發。如果用DAC治療後仍然有任何腫瘤活動，則由於SCLC的快速翻倍和廣泛轉移，SCLC患者將在一年內復發。此外，SGA還增強了順鉑誘導的肺癌細胞毒性[24]。這意味著DAC也可以作為接受順鉑化療的SCLC患者的佐劑。

從首次被診斷為SCLC直到DAC治療結束，患有糖尿病史（II型）的患者恢復的正常血糖和糖化血紅蛋白水平分別為140至94 mg / dL和7.2％至6.2％。 與前兩年未接受DAC治療的患者相比，該患者的空腹血糖和糖化血紅蛋白水平分別為127至107 mg / dL和7.6％至6.6％（表S2）。 考慮到患者的飲食攝入量在此期間沒有變化，這種改善很可能歸因於AC的抗糖尿病作用，因為它具有多種抗糖尿病化合物，例如DEA，antcin K，eburicoic acid，DSA和antcin B [11,25,26,27]。

關於SCLC患者肝腎功能的改善，據報導AC菌絲體可降低與減少裂解的caspase -3，-8和-9的表達以及磷蛋白激酶B的水平相關的氧化應激（ Akt）和肝臟中的磷核因子-κB（NF-κB）[28]。來自AC子實體的化合物Antcin B和antcin K可對ALT和AST的血清水平產生劑量依賴性的降低作用，並通過與IL-下調相關的抗炎機制降低肝臟壞死的發生率。肝組織中的1β，TNF-α，iNOS，COX-2和NF-κB[29]。來自AC子實體的Antcin H可通過破壞p-JNK與Sab，外膜p-JNK受體和底物的結合而防止肝損傷，從而乾擾依賴於活性氧（ROS）的自我維持激活絲裂原激活的蛋白激酶（MAPK）級聯[30]。已經發現，AC菌絲體中的喹諾酮可減輕高血壓，並通過減少氧化應激和炎症改善腎臟功能。它通過調節NF-κB途徑降低了腎臟中促炎細胞因子的濃度[31]。

在DAC治療期間，舒張壓（DBP）和收縮壓（SBP）分別從52毫米汞柱和102毫米汞柱升高到106毫米汞柱。此外，經過DAC處理後，DBP從64毫米汞柱恢復到59毫米汞柱。但是，他的SBP從106 mmHg升高到112 mmHg（圖3a）。與不使用DAC治療期間的收縮壓和舒張壓之間的差異相比，減少了DAC治療期間的收縮壓和舒張壓之間的差異。這可能表明在DAC治療期間動脈壁彈性增加，儘管DBP升高可能是DAC的潛在副作用。

2016年，一項評估AC對接受標準化療的晚期癌症患者的治療效果的臨床研究得出結論，治療30天后，AC組的血小板計數顯著低於安慰劑組。但是，由於DAC治療六個月後患者的血小板計數未顯示明顯變化，因此我們沒有觀察到DAC干擾血小板生成過程的任何證據（圖S1e）。

哪些因素會影響使用藥用真菌牛樟芝（AC）的效率？

2016年，一項臨床研究表明，在僅持續30天的短期治療後，與化療聯合使用AC並不會影響胃癌，肺癌，肝癌，乳腺癌和結直腸癌的腫瘤大小進展[22]。他們推測長期治療的必要性可能顯示出AC的療效。在這項研究中，我們的患者接受了更長時間的AC治療，沒有化療的副作用。相反，我們證明了使用DAC長期（六個月）後的抗腫瘤作用。值得注意的是，有糖尿病（II型）和高血壓病史的患者恢復了正常的血糖水平，腎功能，中性粒細胞和淋巴細胞計數，以及肝功能在正常範圍內。用於人體試驗的AC菌絲體水提取物主要由2100 mg多醣，172 mg三萜和2687.5 mgγ-氨基丁酸組成。此外，持續時間短得多的臨床試驗的參與者每天兩次服用20 mL口服製劑中的水提取物，共30天。相比之下，我們的患者每天僅服用10克DAC，持續六個月。 DAC的原始粉末由多醣，苯並類化合物和指示化合物組成，這些化合物具有多種生物學活性，例如免疫調節，抗癌活性，抗炎活性，抗糖尿病活性，肝保護作用和腎臟保護作用。但是，在停止使用DAC後，患者的血清生化狀況在三個月到一年後逐漸恢復（圖S1a-d）。儘管如此，在長期治療期間，DAC顯然對SCLC患者發揮了抗腫瘤作用。長期攝入DAC似乎有益，特別是對於SCLC患者。我們假設DAC的腫瘤抑製作用以及血液學和生物化學讀數所支持的健康益處，有助於改善無進展生存期。此外，患者肝臟和腎臟功能的改善也證明了DAC的安全性。

DAC甲醇提取物的HPLC譜

在台灣，AC是一種極為罕見的天然真菌，由於需求量大，被認為是最昂貴的草藥。當前，可以通過多種方法來培養AC，包括木態培養，培養皿培養，固態發酵和深層發酵。培養條件（例如培養方法，溫度，pH和時間）會顯著影響生物活性成分的組成和含量，而無意中影響了培養產物的治療效果。木態栽培是最接近野生AC蘑菇生長條件的方法。三萜類化合物含量豐富，被認為是AC子實體的主要活性成分，具有許多藥理和治療作用[32]。我們的結果表明，DAC包含的索引化合物特徵與木態栽培AC子實體的特徵化合物非常相似。我們的結果表明，DAC可以被視為一種可靠的繁殖方式，可以滿足對野生AC蘑菇不斷增長的需求。

結論

在這名SCLC患者中，獨特的治療方法通過每天使用高達10 g / day的DAC六個月來顯著降低了腫瘤的大小。 DAC的作用似乎通過其抗糖尿病，保肝和保護腎臟的功能延長了生存時間，並且沒有復發，並改善了生活質量。 儘管在這種情況下，我們無法證明其免疫調節，抗血管生成，抗轉移，抗增殖和促凋亡作用，如文獻中所述，患者的顯著改善可能歸因於這些機制。 最重要的是，我們已經證明，DAC可以用作具有多種機制的補充藥物，以減少SCLC患者的腫瘤大小並改善無進展生存期。 當然，只有一個案例不足以得出確定的結論。 需要更多的臨床研究來確認DAC對肺癌的作用。 據我們所知，這是第一例顯示DAC對SCLC患者的治療效果的病例報告。